1．每次使用前應檢查生物安全柜的正常指標，包括風速、氣流量和負壓在正常范圍。若出現異常應停止使用，進行檢修工作。
2．在使用中不能打開玻璃觀察窗。
3．生物安全柜內應盡量少放器材或樣品，不能影響后部壓力排風系統的氣流循環。
4．生物安全柜內不能使用酒精燈，允許使用微型電加熱器，最好使用一次性無菌接種環。
5．所有工作必須在工作臺面的中后部進行，并能夠通過玻璃觀察擋板看到。操作者不要頻繁移動手臂及揮動手臂以免破壞定向氣流。
6．盡量減少操作者身后的人員走動以及快速開關房間的門，以防止對生物安全柜的氣流造成影響。
7．操作時廢物袋以及盛放廢棄吸管的容器等必須放在安全柜內而不應放在安全柜之外。污染的吸管、容器等應先在放于安全柜內的裝有消毒液的容器中消毒1h以上，方可轉入醫療廢物專用垃圾袋中進行高壓滅菌等處理。
8．潔凈物品和使用過的污染物品要分開放在不同區域，工作臺面上的操作應按照從清潔區到污染區的方向進行，以避免交叉污染。
9．工作開始前和結束后，安全柜的風機至少運行5min，工作完成后應使用適當的消毒劑對生物安全柜的表面進行擦拭。
10．生物安全柜內不能進行文字工作。
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